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  • 政府重点建设

    生物医药研发公共服务平台创新驱动企业

    珠海百试通生物科技有限公司,是珠海市金湾区政府重点建设的生物医药研发公共服务平台创新驱动企业

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    胶原

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    鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明

    【产品名称】鼠尾胶原蛋白Ⅰ型( Rat tail tendon collagen Type Ⅰ)

    【产品介绍】

    本产品通过混合酶法,通过醋酸抽提、氯化钠沉淀磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的,可以用于包被细胞培养器
    皿,培养一些在普通细胞培养皿中不易贴壁的细胞,也可以用于制备三维胶,模拟真实的生长环境,使细胞在三
    维环境中生长。

    【质量保证】

    本产品来源于S P F级别的S D大鼠鼠尾腱,所有饲养S D大鼠无特定病原体,原料来源安全、可靠、原料供应充足
    且均一性好。本中心上级主管部门为广东省卫生厅,产品质量可靠、有保证。

    【特       色】

    SPF级别的胶原蛋白来源 专业的动物饲 养环境 高纯度的I型胶原蛋白 体外细胞培养的利器。

    【使用方法】

    1、细胞壁培养皿的表面包被推荐浓度:1 - 5 u g / c m2

    以包被浓度为2 u g / c m 为例:用无菌0 . 0 0 6 m o l / L(0 . 3 6 g / L)乙酸将胶原蛋白稀释到0 . 0 1 2 m g / m l。按表(一)体积加到相应的培养器皿中,确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面,开盖在超净台上过夜晾干。也可以在室温放置1小时后,用P B S洗3 - 4次后直接使用或晾干.包被好的器皿在4 - 2 5℃至少可保存3个月以上的时间。

     

    表面积( c m2 ,每孔或每皿)

    加入0 . 0 1 2 m g / m l胶原的体积

    9 6孔细胞培养板

    0.3

    50 

    2 4孔细胞培养板

    1.9

    300

    1 2孔细胞培养板

    3.8

    600

    6孔细胞培养板

    9.5

    1580

    3 5 m m细胞培养皿

    8

    1330

    6 0 m m细胞培养皿

    21

    3500

    1 0 0 m m细胞培养皿

    55

    9170

    2、三维胶原的制备

    鼠尾胶原蛋白I型在浓度1 m g / m l以上,p H = 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1 - 2 m g / m l。鼠尾胶原蛋白溶解于0 . 0 0 6 m o l / L乙酸中,在成胶过程中需要加入0 . 0 6 X体积0 . 1 m o l / L N a O H来中和。

    需要的溶液(均需要无菌、预冷):

    1 0 x P B S(可含1 0 m g / L的酚红用于p H指示),或1 0 x培养液

    0 . 1 m o l / L N a O H,0 . 1 m o l / L 乙酸(一般不用),双蒸水

    A . 不含细胞的三尾胶原的制备(以配制1毫升,1 m g / m l三维胶为例):将2 0 0 u l鼠尾胶原蛋白I型(5 m g / m l)加到置于冰浴的离心管中,加入6 9 0 u l H O。然后加到1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H中(如果反过来把1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H加到胶原溶液中,会由于N a O H不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即加入1 0 0 u l 1 0 x P B S或1 0 x培养液,混匀后立即加到培养皿中(混匀后p H为7左右,如果P B S或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用p H试纸测试)。将培养器皿在室温下放置2 0分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配置中使用的是1 0 x P B S,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

    B .含细胞的三维胶原的制备(以配置1毫升,1 m g / m l三维胶为例):准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。将2 0 0 u l鼠尾胶原蛋白I型(5 m g / m l)加到1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H中(如果反过来把1 2 u l 0 . 1 m o l / L N a O H加到胶原溶液中,会由于N a O H不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入2 3 u l 1 0 x P B S或1 0 x培养液,混匀(混匀后p H为7左右,如果P B S或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用p H试纸测试)。加入7 6 0 u l的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养皿中。将培养器皿在室温下放置2 0分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。

    注:鼠尾胶原蛋白I型在室温下p H中性时可迅速成胶,在操作过程中要尽量保持低温(检测报告)。

    2019年9月4日 09:56
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